本发明提供了一种谷氨酸生物素亚适量发酵工艺,利用发酵罐和膜偶联技术在发酵过程进行过滤透析,将发酵液中的谷氨酸及时分离,解除了发酵液中高浓度谷氨酸产生反馈调节；通过采用特定的透析发酵培养基配方进行再次发酵,提高菌体利用效率和糖酸转化率；另外,在发酵一定阶段后进行过滤透析可及时分离发酵液中的有毒害副产物,减小了对菌体产酸抑制；本发明所述发酵工艺通过透析发酵实现了菌体的再发酵技术,延长了谷氨酸发酵产酸周期,提高了菌体利用率,提高了糖酸转化率。