本发明提供了一种用于产生5-羟基色氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用,首先对大肠杆菌中色氨酸合成途径和整个氨基酸代谢网络中与色氨酸相关的代谢流进行分析重构,加强了5-HTP前体物色氨酸的供应。之后又引入人源2型色氨酸羟基化酶突变体和四氢蝶呤合成与再生途径,打通色氨酸胞内羟化反应,得到了一株遗传背景清晰、能通过微生物直接发酵法高效稳定生产5-HTP的无质粒基因工程菌,具有良好的应用价值。