本发明公开了一种生物条形码荧光免疫探针的低温冷冻制备方法,并将合成荧光免疫探针应用于新烟碱类农药吡虫啉(IMI)的检测中。本发明优点是：利用冷冻法将ssDNA与AuNPs偶联,大大缩短了合成时间,本方法仅需2h即可完成偶联,偶联效率高,ssDNA负载率大,制备的荧光免疫探针荧光强度高,且该方法的合成pH值为8.0左右,可以有效保护Ab不受极端pH值的影响,也能有效防止AuNPs的聚集。用该荧光免疫探针构建的生物条形码荧光免疫检测方法对IMI具有较高的特异性、高灵敏度和较低的检测限。该发明有望作为IMI的快检技术用于食品危害物的快速检测。