在大肠杆菌中无需包涵体复性制备溶栓药物瑞替普酶的方法
技术类型 ： 专利
专利所属地 ：中国
公开号 ：CN201010212836.X
技术成熟度 ：正在研发
转让方式 ：技术转让
交易价格：面议
应用领域 ： 医药制造业
技术领域 ：生物与新医药
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成果概况
简介
本发明涉及一种无需包涵体复性、直接通过大肠杆菌表达系统制备溶栓药物瑞替普酶(Reteplase,rPA)的方法。通过PCR扩增得到rPA的基因片断,将该基因片断克隆到载体pET40b中,构建得到pET40b-rPA重组质粒,且使rPA与载体pET40b中的二硫键异构酶DsbC融合表达。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,分别优化确立了IPTG及乳糖的诱导表达条件。所获得目的融合蛋白主要以可溶性成分表达,经镍柱亲和层析纯化后,用Xa因子(或甲酸、凝血酶)处理可获得高纯度的rPA目的蛋白。纤维蛋白平板法检测结果显示：本方法所获得的融合蛋白DsbC-rPA及去除标签纯化所得rPA蛋白均具有显著的溶栓活性。
专利基本信息
| 专利名称 | 在大肠杆菌中无需包涵体复性制备溶栓药物瑞替普酶的方法 | ||
| 专利状态 | 其他 | 公开号 | CN201010212836.X |
| 申请号 | CN101892253A | 专利申请日期 | 2010-06-30 |
| 专利授权日期 | 0001-01-01 | 专利权届满日 | - |
| 专利所属地 | 中国 | 专利类型 | 实用新型 |
| 发明人 | 天津科技大学 | ||
| 权利人 | 张同存,罗学刚,田文静,姜勇,王楠,路福平 | ||
| 专利摘要 | 本发明涉及一种无需包涵体复性、直接通过大肠杆菌表达系统制备溶栓药物瑞替普酶(Reteplase,rPA)的方法。通过PCR扩增得到rPA的基因片断,将该基因片断克隆到载体pET40b中,构建得到pET40b-rPA重组质粒,且使rPA与载体pET40b中的二硫键异构酶DsbC融合表达。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,分别优化确立了IPTG及乳糖的诱导表达条件。所获得目的融合蛋白主要以可溶性成分表达,经镍柱亲和层析纯化后,用Xa因子(或甲酸、凝血酶)处理可获得高纯度的rPA目的蛋白。纤维蛋白平板法检测结果显示：本方法所获得的融合蛋白DsbC-rPA及去除标签纯化所得rPA蛋白均具有显著的溶栓活性。 | ||