本发明涉及基因工程技术领域，尤其是一种基于复合碳源代谢分工产N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌及其应用。

通过构建强化N‑乙酰氨基葡萄糖合成途径，并敲除6‑磷酸果糖激酶基因，定向点突变甘油激酶表达基因，对甘油葡萄糖复合碳源的利用进行了代谢分工，使葡萄糖主要用于目标产物N‑乙酰氨基葡萄糖的生产，甘油主要用于细胞生长，以提高N‑乙酰氨基葡萄糖的合成效率。

混合碳源培养基摇瓶发酵48h后N‑乙酰氨基葡萄糖的产量最高达到107.8g/L，复合碳源转化率最高达到49％，相比于葡萄糖利用菌株，产量提升了151.7％，转化率提升了60.2％，具有较强的工业化生产潜力。