本发明提供了一种亮氨酸生产菌株及其构建方法与应用,所述菌株是利用代谢工程改造方法在出发菌株C.glutamicum基础上进行进一步改造获得的亮氨酸辅因子平衡生产菌株,具体为：使用Ptuf启动子过表达leuA～(fbr)、ilvBN～(fbr)、leuCD、lrp和brnFE基因,使用Ptuf启动子异源表达pntAB和bcd基因,将gapX基因自身PgapX启动子和ilvC基因自身PilvC启动子替换为Ptuf启动子,敲除brnQ、ldh、pqO、adhE、ackA、pta、ilvE基因；所述菌株能够以生产成本较低的葡萄糖作为碳源,具有生产成本低,稳定性高的特点,具有大规模生产亮氨酸的潜力。