本发明涉及一种具有优良转运和反应活性的甾体C1,2脱氢反应工程菌株,通过在简单节杆菌中过表达转运蛋白、或者共表达转运蛋白和热激蛋白来提高菌株的转运能力和胁迫耐受性,获得的上述工程菌株在高浓度底物和有机溶剂的转化体系中仍保持良好的催化活性,C1,2脱氢反应产率较对照菌株提高了1.42％-51.74％。这种具有强转运能力和胁迫耐受性工程菌株,提高了转化体系中底物和有机溶剂浓度,进而提高了产物生成量,对于甾体类疏水性化合物高浓度底物转化效率的提高具有重要的指导意义。