一种啤酒酵母中表达苯丙酮酸脱羧酶Aro10的构建方法
技术类型 ： 专利
专利所属地 ：中国
公开号 ：CN201811186280.4
技术成熟度 ：正在研发
转让方式 ：技术转让
交易价格：面议
应用领域 ： 研究和试验发展
技术领域 ：生物治疗技术和基因工程药物
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成果概况
简介
本发明的目的在于构建一种啤酒酵母中表达苯丙酮酸脱羧酶Aro10的方法,具体步骤如下：(1)啤酒酵母基因组的获得：将啤酒酵母TT21三区培养,直至出单克隆,然后平涂在平板上获得菌体,用SDS处理获得啤酒酵母基因组；(2)目的基因的克隆：利用合理引物、条件,PCR扩增出Aro10(S.c)、Aro10(S.b)的基因；(3)构建表达载体：以pYPGE15质粒为载体,将Aro10(S.c)、Aro10(S.b)基因分别插入启动子PGK下游,构建pYPGE-ARO10(S.c)、pYPGE-ARO10(S.b)表达载体；(4)获取重组菌株：将pYPGE-ARO10(S.c)、pYPGE-ARO10(S.b)表达载体通过醋酸锂化学转化法转入啤酒酵母TT21中,得到Aro10的重组酵母；(5)重组菌株的啤酒发酵；(6)苯乙醇含量检测：采用高效液相色谱法进行检测芳香醇含量的变化。
专利基本信息
| 专利名称 | 一种啤酒酵母中表达苯丙酮酸脱羧酶Aro10的构建方法 | ||
| 专利状态 | 实审 | 公开号 | CN201811186280.4 |
| 申请号 | CN109234303A | 专利申请日期 | 2018-10-12 |
| 专利授权日期 | 0001-01-01 | 专利权届满日 | - |
| 专利所属地 | 中国 | 专利类型 | 发明 |
| 发明人 | 天津科技大学 | ||
| 权利人 | 钟成, 丁霄彤, 张凯月, 刘伶普, 贾士儒 | ||
| 专利摘要 | 本发明的目的在于构建一种啤酒酵母中表达苯丙酮酸脱羧酶Aro10的方法,具体步骤如下：(1)啤酒酵母基因组的获得：将啤酒酵母TT21三区培养,直至出单克隆,然后平涂在平板上获得菌体,用SDS处理获得啤酒酵母基因组；(2)目的基因的克隆：利用合理引物、条件,PCR扩增出Aro10(S.c)、Aro10(S.b)的基因；(3)构建表达载体：以pYPGE15质粒为载体,将Aro10(S.c)、Aro10(S.b)基因分别插入启动子PGK下游,构建pYPGE-ARO10(S.c)、pYPGE-ARO10(S.b)表达载体；(4)获取重组菌株：将pYPGE-ARO10(S.c)、pYPGE-ARO10(S.b)表达载体通过醋酸锂化学转化法转入啤酒酵母TT21中,得到Aro10的重组酵母；(5)重组菌株的啤酒发酵；(6)苯乙醇含量检测：采用高效液相色谱法进行检测芳香醇含量的变化。 | ||