本发明属于基因工程技术领域,公开了一种载体、低分子量透明质酸合成菌株及其构建方法与应用,所述菌株为将基因gntR4过表达质粒pDL278::Ppgk::gntR4转入宿主菌,获得过表达gntR4基因功能的工程菌。本发明基因工程菌株应用于低分子量透明质酸的生产,通过发酵法可以获得稳定的小分子量透明质酸。该基因工程菌株具有很好的工业化应用前景。本发明将过表达gntR4基因的重组菌进行发酵分析,利用琼脂糖凝胶电泳分析以及HPGPC法测定HA的分子量,得到分子量为1.2MDa左右的HA,与野生型兽疫链球菌相比,透明质酸分子量降低了约32％。