本发明属于基因工程、代谢工程技术领域,公开了一种发酵生产L-组氨酸的大肠杆菌基因工程菌、方法及应用,所述菌株是以野生型大肠杆菌MG1655为出发菌株,在基因组上敲除基因lacI和基因purR；整合基因prs、基因zwf和基因gnd；整合基因hisG、hisD、hisB、hisC、hisA、hisF/H、hisIE；整合基因cgl2458。本发明利用分子生物学技术,将高产组氨酸的粘质沙雷氏菌突变株中的组氨酸操纵子整合到大肠杆菌基因组中,通过强化前体物PRPP供应以及组氨酸外排等策略,获得了一株能够高产组氨酸的大肠杆菌基因工程菌,可以解决发酵液粘稠,产物难以提取的问题,具有较好的工业应用潜质。