本发明公开了一种利用酿酒酵母非细胞提取物体外检测DNA修复的方法,属于基因工程技术领域,该方法包括：利用化学药物损伤处理酿酒酵母菌株,之后加入酵母裂解酶后进行超声破碎处理,获得含有细胞核以及染色质组织的酿酒酵母非细胞提取物；将含有该酿酒酵母非细胞提取物的修复体系进行孵育。本发明使用不同药物损伤处理的酿酒酵母细胞制备非细胞提取物,保留完整的细胞核及染色质组织,在含有能量基团以及生物素化dUTP的修复体系中孵育后,细胞核能够启动DNA修复合成,用于体外检测DNA修复效率,为研究酿酒酵母DNA修复机制提供了便捷的体外检测方法。