本发明公开了一种基于荧光淬灭技术的碱性蛋白酶的活性检测方法,本发明以Dabcyl-KTXXV↓L↓QXXF↓RXM↓E-Edans为模版构建了3200000条多肽序列,该模板的N端基团Dabcyl是一种荧光淬灭剂,C端Edans是一种荧光基团,氨基酸序列采用单字母表示,X为20种常见的氨基酸中的任意一种。然后经过分子模拟方法筛选确定了Dabcyl-KTSAVLQSGFRKME-Edans为最优的荧光底物。将碱性蛋白酶和荧光底物共孵育后,检测他们在510nm处的荧光强度,并据此来判断碱性蛋白酶的酶活。本发明的检测最低限为2.8U/mL,与现有方法相比更为简单快速,可以提高检测效率、降低检测成本,在碱性蛋白酶突变株的高通量筛选中具有较好的应用前景。