本发明涉及针对甲胎蛋白(alpha-fetal protein,AFP)特异性结合多肽及其应用,属于生物技术领域。其中,所述多肽由葡萄球菌蛋白A(SPA)免疫球蛋白结合区域通过突变1-20个氨基酸残基获得(多肽序列见SEQ ID：2-14),能够特异性结合甲胎蛋白。本发明通过三轮富集从全合成亲合体多肽分子库淘选获得甲胎蛋白特异性结合多肽编码序列,并利用原核表达系统对获得的多肽进行了大量制备,该多肽与甲胎蛋白特异结合,与CEA、EGF、BSA、胰岛素等蛋白无明显亲和,且相比于单克隆抗体具有制备成本低、稳定性好等显著优点。本发明还进一步应用该多肽及其变体作为酶联免疫检测中的捕获元件,用于甲胎蛋白定量检测,检测灵敏度分别为8和2ng,检测线性范围分别为10-100ng和6-100ng,可满足临床检测需求。