本发明属于酶的基因工程技术领域,具体涉及一种酶活性提升的黄素单加氧酶突变体及其制备与应用。通过全基因合成来自大蒜(Allium sativum)的野生型黄素单加氧酶基因,利用易错PCR技术对野生型黄素单加氧酶基因进行随机突变,得到黄素单加氧酶突变体N91G,及其编码基因asfmom,重新构建重组质粒,并实现了其在大肠杆菌和毕赤酵母中的高效表达,通过发酵、提取等技术获得活性进一步提高的黄素单加氧酶。