一种采用基因工程菌发酵产酶制备利巴韦林的方法,首先利用分子生物学技术构建高效表达具有高酶活力的低分子量三聚体嘌呤核苷磷酸化酶的基因工程菌E.coliXL-Blue(pPNP816),然后将该基因工程菌经种子培养基培养后再接入发酵培养基进行产酶发酵,最后以所得菌体为酶源,以鸟苷和TCA为反应底物进行酶促反应制备利巴韦林。该制备方法采用基因工程菌,酶活性高,目的蛋白得以高效表达；发酵周期短、产酶效率高、菌体密度高；底物转化率高,可达78~85%；而且工艺简单,环境污染低,降低了利巴韦林的生产成本,有利于工业化生产的推广和应用。