本发明属于微生物制药及医药工程领域,具体涉及以简单节杆菌为菌种、醋酸氢化可的松为底物并采用微生物转化的一种醋酸泼尼松龙的生产方法。本方法是用简单节杆菌为菌种,经一级种子培养、二级发酵培养、在菌体发酵液中投入醋酸氢化可的松转化生成醋酸泼尼松龙;需要说明的是在将菌体制成双液相、破碎细胞、原生质体,其转化率都很高,转化完成后,过滤,收集滤饼,可制得醋酸泼尼松龙。本发明所涉及的生产方法是以醋酸氢化可的松为原料替代醋酸可的松,收率高,工艺简单,经济实用,能够尽量避免使用各种有害试剂,对用生物转化法生产甾体药物有着非常重要的意义。