本发明涉及一种从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法,包括发酵液蛋白酶的失活,发酵液中乳酸片球菌素PA-1的释放,板框过滤除菌和颗粒状杂质,微滤除大分子杂质,二步超滤：即第一步选用截留分子量为10000-30000道尔顿的超滤膜,主要目的是除去大分子蛋白、核酸和胶体等,第二步选用截留分子量为1000-3000道尔顿的超滤膜,主要目的是除去小分子杂质并浓缩。最后将浓缩液经C18制备色谱纯化并冷冻干燥或加入食盐填料,进行喷雾干燥得到粉末状成品。本发明工艺方法全程流体操作、能耗低、劳动强度低、条件温和、易于工业放大、适用于多种后续纯化方法；产品质量稳定；不消耗有机溶剂,安全环保。