本发明属于生物化工技术领域,公开了一种实现高纯度不饱和透明质酸二糖的制备方法,包括以下步骤：配制高分子透明质酸底物溶液；配制透明质酸酶液；加入底物溶液和酶液,酶解,终止反应；离心取上清；超滤；冷冻真空干燥,制备成粉末。本发明方法酶解反应总周期为6h,大大缩短酶解时间,该方法只需定时补加2次酶液,简化操作工艺流程,同时该实验方法能实现透明质酸的完全充分降解为不饱和透明质酸二糖,整个反应体系里的无机盐只有磷酸钠盐简化了后续除盐工艺。