本发明提供了一种生产5-羟基色氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用,所述基因工程菌在原有5-HTP工程菌株的基础上,应用了一种异源表达活性高、毒性低的色氨酸羟化酶突变体,构建了更加高效的色氨酸羟化途径；同时通过适度表达异源来源于Exiguobacterdium sibiricum的葡萄糖脱氢酶(GDH-(esi))途径,构建了NAD(P)H再生途径,最终大幅提高了工程菌株的5-HTP产量,并有效降低了中间体L-Trp的积累浓度,得到了一株遗传背景清晰、能通过微生物直接发酵法高效稳定生产5-HTP的基因工程菌,具有良好的应用价值。