本发明属于发酵工程领域,具体涉及一种通过生物转化制备甘露醇的方法,尤其是通过布氏乳杆菌发酵-转化-分离三者偶联制备甘露醇的新方法。本发明针对所用菌种,优化底物中果糖葡萄糖的比例,使得发酵-转化-分离偶联制备甘露醇时,能够实现果糖葡萄糖的同比例消耗,从而保证连续操作时葡萄糖和果糖含量保持在极低的水平,转化产物中主要含有甘露醇、乳酸和乙酸,只需经脱酸树脂吸附乳酸和乙酸,即可以实现甘露醇和乳酸的高效快速分离,因此分离步骤变得简单易用实现,同时成本相对也大大降低。