本发明公开了一种新型产乙酸乙酯酿酒酵母菌株及其构建方法,属于生物工程技术领域。本发明通过在出发菌株中,以转录调节因子Gal80基因作为整合位点,同时选用强启动子PGK1p过表达绿色植物来源的醇酰基转移酶AAT,提供两株低产高级醇高产乙酸乙酯的酿酒酵母菌株α-AeAT9和α-VAAT。玉米水解液发酵5天后,过表达醇酰基转移酶AeAT9和VAAT的改造菌株其乙酸乙酯的含量分别达883.6mg/L和228.4mg/L,分别是出发菌株的40.9倍和10.6倍；主要高级醇(异丁醇、异戊醇、正丙醇、苯乙醇)含量分别为101.1mg/L和124.9mg/L,分别较出发菌株降低了49.5％和23.5％,满足白酒相关领域对酵母的较高要求,具有广阔的应用前景。