本发明公开了一种高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶及其制备方法与应用,通过提取星海链霉菌的基因组；以基因组为DNA模板,采用PCR扩增技术,得到星海链霉菌中的甲硫氨酸腺苷转移酶的基因序列即metK目的片段；将metK目的片段与表达载体pET-32a(+)进行双酶切后连接,构建重组质粒；采用热激化法将重组质粒转化到大肠杆菌BL21的感受态细胞中,并经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,得到SxMAT；通过对高立体选择性的甲硫氨酸腺苷转移酶进行变性后复性的方式,得到高纯度的SxMAT,所述SxMAT在温度为25-55℃,pH值为8-10.5时稳定性好,且产物的光学纯度(ee)>90％,产率为80％,SxMAT与氟化酶联用构建体外双酶级联反应,有益于人们对链霉菌中氟化通路的理解以及衍生对氟化天然产物的应用。