本发明提供了一种基于羧基功能化膦基离子液体@多壁碳纳米管的血红蛋白生物传感器的制备方法,属于材料制备和电化学生物传感分析技术领域。本发明首先依次通过水热法和室温搅拌法合成疏水型羧基功能化膦基离子液体,并通过一步超声法制成离子液体@多壁碳纳米管杂化材料,然后将其滴涂在玻碳电极表面,随后将血红蛋白和Nafion依次滴涂在离子液体@多壁碳纳米管修饰的电极表面,构建检测有机磷农药甲基对硫磷的血红蛋白生物传感平台。本发明构建的传感器工序简单、操作方便、成本低廉,合成的传感基底有助于提高电极界面稳定性和电子传导能力,克服了传统电化学分析方法灵敏度低的缺点,工序简单、操作方便、成本低廉,提高了电化学检测准确度和检测效率,检出限为0.62ng/mL,适用于检测甲基对硫磷。