本发明属于生物催化技术领域,具体涉及一种甾体羟化酶的高效筛选方法。本发明针对雷斯青霉的生长特性和产酶特性,获得了雷斯青霉专用的高效产孢培养基,然后通过筛选合适的助溶剂和建立最佳诱导条件进一步强化了诱导过程对目标基因转录表达的良性驱动,同时引入转录组测序和qRT#PCR组合的方法借助计算机分析生物信息学信息形成了高效筛选具备C15α位羟化酶功能编码基因的识别方法,获得来源于雷斯青霉的C15α位羟化酶编码基因,在原始基因序列的基础上通过进一步筛选获得编码高活性C15α位羟化酶的新基因。