本发明涉及一种α‑酮基丁酸的发酵生产工艺，利用热诱导型表达载体过表达经过定点突变的苏氨酸脱水酶编码基因ilvA并敲除乙酰羟基酸合成酶III的大亚基编码基因ilvI；所用菌株是以苏氨酸生产菌株E.coliTHRD为出发菌株；

该生产工艺可以有效解决发酵过程中α‑酮基丁酸对菌体生长和产酸的抑制问题，发酵28h后α‑酮基丁酸最高产量可以达到22.8g/L。