本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种生产羟基四氢嘧啶基因工程菌的构建及其应用。本发明在基因组上对羟基四氢嘧啶合成途径中的关键基因进行强化,并减弱羟基四氢嘧啶竞争抑制途径,构建羟基四氢嘧啶合成途径,并过表达异柠檬酸脱氢酶编码基因icd以增加前体物α-酮戊二酸的供应,同时通过esaI/esaR群体感应线路策略对前体物质α-酮戊二酸的供应进行动态调控,根据细胞密度自动调节α-酮戊二酸在三羧酸循环中的代谢,得到一株羟基四氢嘧啶高产菌。所构建菌株可以在不添加α-酮戊二酸的发酵条件下,实现羟基四氢嘧啶的高效合成,且无副产物四氢嘧啶的积累,具有重要的工业应用价值。