本发明公开了一种无载体沉淀交联杂化纳米花共固定化双酶催化剂的制备方法,通过将N-氨甲酰水解酶沉淀交联在D-对羟基苯海因酶杂化纳米花上成功制备出无载体沉淀交联杂化纳米花共固定化双酶催化剂,表现出优秀的pH稳定性、变性剂稳定性和重复使用稳定性,酶活回收率高达87.8％。本发明制备得到无载体沉淀交联杂化纳米花共固定化双酶拥有与传统共固定化双酶完全不同的颗粒外貌形态,不仅解决了传统固定化双酶方法固定化效率低、酶活损失严重、成本高的问题,而且,基于本发明技术制备的无载体沉淀交联杂化纳米花共固定化双酶可以高效制备D-对羟基苯甘氨酸。