本发明公开了一株高产酯低产高级醇酿酒酵母菌株及其构建方法,属于生物工程技术领域。本发明通过在出发菌株中,完全敲除氨基酸转氨酶基因BAT2和酯水解酶基因IAH1,同时选用强启动子PGK1过表达醇乙酰基转移酶I基因ATF1,来获得该高产酯低产高级醇酿酒酵母菌株。与亲本菌株相比,所构建的重组菌其它发酵性能不受影响,乙酸酯的总量显著提升,达到1303.6mg/L,其中乙酸乙酯的含量是出发菌株的52倍,乙酸异戊酯提高到73.7mg/L,主要高级醇含量为151.8mg/L,较出发菌株降低了61.4％。该酿酒酵母显著提高酯产量的同时降低高级醇产量,满足白酒相关领域对酵母的较高要求,应用前景广泛。