一种磷脂酶及其基因、工程菌和制备方法。本发明属于酶的基因工程技术领域,本发明属于酶的基因工程技术领域,具体涉及通过易错PCR技术及重叠PCR技术体外定向进化获得比酶活提高的磷脂酶D突变体,然后将高活力的磷脂酶D基因分别在枯草芽孢杆菌表达系统、解淀粉芽孢杆菌表达系统和地衣芽孢杆菌表达系统中进行表达,表达后,检测高活力磷脂酶D的比酶活较野生型磷脂酶D最高可提高500％。将高活力磷脂酶D在枯草芽孢杆菌表达系统、地衣芽孢杆菌表达系统、解淀粉芽孢杆菌表达系统内发酵,并且利用高活力磷脂酶D有效地制备磷脂酸、磷酯酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺,磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇。