一种利用碱蓬细胞悬浮培养生产脯氨酸的方法,属于生物技术和生物工程领域。为适应盐碱环境碱蓬细胞分泌脯氨酸,以此细胞为发酵生物,可以进行大规模悬浮培养生产脯氨酸。首先,制备碱蓬无菌苗,用其子叶诱导愈伤组织,并经过继代培养获得松散型愈伤组织；然后,用松散型愈伤组织进行振荡培养制备悬浮细胞体系；过筛后继代培养获得稳定的、分散度好的悬浮细胞系；经过看护培养筛选高产细胞系；再次,确定碱蓬细胞积累脯氨酸的NaCl添加时期和添加量；最后,优化其悬浮细胞培养基和培养条件,获得其细胞生长和脯氨酸积累的最适碳氮源、pH、温度、溶氧量、和最佳植物激素组合和接种量等主要发酵工艺参数,为大规模细胞悬浮培养提供依据。本发明为碱蓬细胞悬浮培养生产脯氨酸提供了工艺流程。