本发明提供了一种发酵耦合泡沫分离制备酶制剂的方法,涉及生物技术领域。本发明提供的方法,首先对构建得到的L-谷氨酸氧化酶高产菌株进行发酵,获得富含L-谷氨酸氧化酶的发酵液,然后将发酵液进行镍柱纯化和泡沫分离,实现对发酵液中L-谷氨酸氧化酶的纯化和富集,该方法简单方便,成本低,为原位发酵液中酶蛋白的一步高效提取的过程强化和工艺优化提供理论基础。