本发明公开了一种提高外源蛋白表达量的双信号肽及其构建方法与用途,属于基因工程技术领域。所述双信号肽来源于芽孢杆菌Sec途径中不同的信号肽的组合。本发明通过从枯草芽孢杆菌信号肽库中,构建双信号肽组合与目的蛋白即蔗糖异构酶、果聚糖蔗糖酶或角蛋白酶基因相结合的表达载体,实现了外源基因的高表达,特别是为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的表达元件及其组合方法。