本发明提供了一种适用于合成熊去氧胆酸的羟基类固醇脱氢酶体系,包含7α-羟基类固醇脱氢酶突变体和7β-羟基类固醇脱氢酶突变体。上述两种酶突变体通过部分氨基酸位点的突变改造,改变了辅酶偏好性并改善了利用辅酶的催化活性,能够在催化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸过程中实现NADH反应自循环补给。本发明同时获得了具有上述双酶突变体的重组毕赤酵母菌株。本发明构建的双酶突变体以鹅去氧胆酸为底物,经过中间产物7-KLCA,高效转化合成为熊去氧胆酸,熊去氧胆酸的产率达到94.05％。本发明可以廉价易得的鹅去氧胆酸为出发底物进行高效生物转化合成高附加值熊去氧胆酸,具有实用且环境友好的特点,同时也解决了辅酶昂贵的问题。