本发明属于酶工程和食品工程技术领域,具体涉及一种乳糖酶酶分子的定向进化、定点突变及其在鲜奶中的应用。本发明获得的乳糖酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。通过对乳糖酶分子的定向人工进化,获得较低温度下高效转化鲜奶中乳糖同时合成低聚半乳糖,并在后续提升温度(如巴氏消毒)下快速失活的乳糖酶新分子,有利于鲜奶中乳糖的高营养化就地生物转化为益生元低聚半乳糖,可进一步提升鲜奶的营养价值并可拓展鲜奶消费群体。