本发明属于医药技术领域,公开了一种用于核酸递送的三组分脂质纳米颗粒及其制备方法。本发明所述脂质纳米颗粒包括三类脂质成分：细胞穿透肽-甾醇耦合物、中性脂质以及PEG脂质。一方面,细胞穿透肽-甾醇耦合物为新型脂质材料,同时替代常规四组分脂质纳米颗粒中的胆固醇组分和可电离阳离子脂质组分,并提供正电荷利于包载带负电的核酸；另一方面,细胞穿透肽-甾醇耦合物完成胞内递送后,可被转化为氨基酸和甾醇,与可电离阳离子脂质相比,毒性显著降低。本发明提供的脂质纳米颗粒具有转染效率高、安全低毒、结构稳定的优点,将本发明所述三组分脂质纳米颗粒应用于核酸药物的包载和递送,具有广阔应用前景。