本发明公开了一种肉葡萄球菌高密度培养基碳源优化的方法及其应用。利用全自动微生物鉴定系统(Biolog)法,由鉴定板中含有的95种不同的碳源、胶质和四唑类物质,对肉葡萄球菌能利用的碳源进行了全面的筛选。基于显色反应原理,仪器在590nm处进行吸光值读数。在Biolog方法中,先用BUG固体平板纯化出待测菌的单菌落,然后用棉签挑取单菌落混匀在装有革兰氏阳性菌接种液中,稀释菌体,接着用排枪吸取稀释菌液接种于GP2阳性96孔板上,连续培养15个小时,每隔1h进行一次读数,然后观察培养孔变色情况,判断该菌能利用的碳源,接着对具体数值进行统计学分析,用直观的数值选择出肉葡萄球菌能利用的优质碳源,进而利用该碳源进行高密度培养。