本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种利用木糖诱导生产N-乙酰神经氨酸的基因工程菌。以大肠杆菌为出发菌株,在基因组上整合N-乙酰氨基葡萄糖合成途径,并引入来自项圈藻的N-乙酰氨基葡萄糖2-差向异构酶基因bAGE以及N-乙酰神经氨酸合成酶基因neuB,构建N-乙酰神经氨酸合成途径,并敲除其分解代谢途径的关键基因nanATEK。同时对合成N-乙酰神经氨酸所需的前体物质的代谢途径进行多拷贝强化并对部分旁路代谢途径进行敲除,通过对产GlcNAc和Neu5Ac的关键酶基因进行不同拷贝数的优化,最终确定了关键酶基因的最佳比例,得到一株N-乙酰神经氨酸高产菌。N-乙酰神经氨酸产量最高可达28g/L,生产强度最高可达0.67g/(L×h),为目前报道的最高值,具有重要的工业应用价值。