纳他霉素的制备方法属于以褐黄孢链霉菌为菌种,发酵法生产、提取纳他霉素的技术。本发明解决了生产纳他霉素使用国外培养基、在国内难以买到、并且价格较高及从发酵液提取纳他霉素工艺复杂、费用昂贵或有副产物的问题。提供了制备、提取纳他霉素的新工艺技术。其技术方案是：采用褐黄孢链霉菌,经孢子悬浮液的制备、种子培养、发酵、提取工序；通过控制pH值和溶解氧水平,及在发酵期间分批次流加葡萄糖的方式制备纳他霉素,提高其产量并采用低温蒸发去除甲醇法提取纳他霉素。本发明工艺简单、经济、实用、提高了纳他霉素的产量和纯度、降低了生产成本,促进其生产的工业化进程。为纳他霉素的广泛应用提供了先决条件。既有经济效益又有社会效益。