本发明涉及一种适用于芽孢杆菌属同源重组的质粒及工程菌,包括序列8的线性片段。所述质粒以16SrDNA的序列作为同源臂,同源臂之间为卡那抗性筛选标记基因、P43启动子、多克隆位点、终止序列。本发明的质粒可以将各种目的基因整合在芽孢杆菌属各种菌上,并可以获得含有不同拷贝数目的基因的转化子,实现目的基因在芽孢杆菌属的稳定高效表达。此外,我们利用此质粒构建了pKD314-apr4M重组质粒,并且通过同源重组方法获得了含有不同拷贝数稳定高产的工程菌。