本发明涉及生物医药领域,具体涉及一种以MSLN为靶点的嵌合抗原受体、由其制备的CAR-T细胞及其应用。所述由N端到C端顺次包括抗MSLN的Scfv片段、CD8α的铰链区、CD8α跨膜结构域和一个共刺激信号4-1BB+CD3ζ；氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。本发明制备的分泌Mesothelin抗体的MesoCAR-T可以显著增强T细胞的特异性杀伤能力,MesoCAR-T对AML的靶向杀伤能力的有效性,杀伤48小时,在效靶比1:1时,杀伤效率最高能达到45％,达到为该疗法临床前的研究提供实验基础的意义。