本发明涉及一种高活力磷脂酶D及细胞表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备,属于用重组DNA技术定点突变野生型磷脂酶D,以改善其活性,并将突变后基因与酵母展示载体pPIC9K-Flo连接,将其在毕赤酵母细胞表面高效展示的方法,涉及具有高活力磷脂酶D及表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备方法。本发明提高了野生型磷脂酶D的活力,并将其展示在酵母细胞表面,提高其稳定性,具有固定化酶的优点。其技术方案是从微生物特别是色褐链霉菌中分离野生型磷脂酶D基因,对其Glu69、Ser285的氨基酸残基进行突变,经在毕赤酵母细胞表面高效表达,检测高活力磷脂酶D酶活较野生型磷脂酶D提高11％,重组菌株GS115/pPIC9K-Flo-pldm高密度发酵制备的全细胞催化剂酶活为120U/(g·干细胞)。