本发明涉及一种胁迫耐受性增强的乳酸菌的构建方法,本发明方法在乳酸菌中分别过表达与菌株胁迫耐受性(酸、乙醇和高温)有关的基因,提高了乳酸菌对乳酸、醋酸、极端pH、乙醇、高温条件的耐受能力,所述构建方法是在乳酸菌中过表达编码酰基载体蛋白的基因acpP、编码乙酰辅酶A羧化酶的基因acc、编码天冬酰胺酶的基因asn、编码ATP合酶的基因atpC、编码冷激蛋白的基因csp、编码锰离子催化酶的基因mnc或者编码细胞壁分离蛋白的基因ftsL。该方法提高了乳酸菌的胁迫耐受性,为提高菌株的工业应用属性和发酵生产能力提供新思路。