本发明提供了一种L-苯丙氨酸生产菌株及其构建方法与应用,所述菌株是以菌株FG105作为底盘菌株,敲除katG基因和yhhY基因,敲除ybiC基因并在该位点整合来源于绿铜假单胞杆菌的pheC基因获得的,能够最大程度的使分支酸合成L-苯丙氨酸,且阻断了L-苯丙氨酸的降解与苯丙酮酸的降解,能够有效提高葡萄糖-L-苯丙氨酸之间的糖酸转化率,提高生产效益,降低生产成本。