铜绿假单胞菌编码多种重要致病因子，同时也存在多种耐药性机制。

该项目的目的是探索致病因子III型分泌系统(typeIIIsecretionsystem，TTSS)与RND抗菌素外排泵的关系。

通过构建TTSS高表达菌株PAK的染色体基因文库，发现菌株PAK编码的RND外排泵MexEF的负调节因子MexS，能够显著提高PAO1菌株TTSS的表达水平；MexS表达依赖于LysR类型转录调节因子MexT的调控，同时调节MexT的表达，二者均参与TTSS的表达；序列分析发现PAK与PAO1中的MexT为活性蛋白，而PAK中的MexS为缺陷蛋白。

综上，MexS的作用机制为抑制TTSS的表达，其在PAK中为缺陷蛋白，导致抑制作用消失；导入PAO1中干扰正常MexS蛋白的抑制作用，部分提高PAO1菌株的TTSS表达。

进一步分析MexT抑制TTSS表达的调控途径，发现基因PA2486编码的小蛋白PtrC，其过表达能够抑制TTSS，该基因缺失不影响TTSS表达；而在mexT突变子中过表达MexS蛋白能够单独完全抑制TTSS的表达。结果显示，MexT抑制TTSS的表达存在两种调控途径。

另外，过表达正常MexS蛋白，不影响MexT控制的其它基因的表达，包括MexEF外排泵、弹性蛋白酶和绿脓素，显示存在不同的调节机制。

该项目建立了关于MexS与MexT调节TTSS、MexEF外排泵、弹性蛋白酶以及绿脓素表达的理论模型。

对于收集的铜绿假单胞菌临床菌株进行了相关性分析。通过构建主要RND外排泵、TTSS调节基因exsA与毒素基因exoT启动子的融合报告基因，对相关基因表达水平进行研究。