1、通过热水浸提和分级醇沉,分别获得分子量平均较大的A粗多糖和分子量较小的B粗多糖。通过RAW264.7细胞MTT增殖实验,对于A和B的活性进行检测,细胞实验结果表明组分A和B均具有促增殖活性,且A的增殖活性明显高于B。选择A进行进一步的分离纯化,纯化出具有较高免疫调节活性的灰树花多糖单一组分GFP-A,其分子量为1000KDa。

2、GFP-A液相色谱呈单一对称峰,利用原子力显微镜和扫描电镜对其宏观结构进行扫描。利用气象色谱测定了其单糖组成和摩尔比,红外光谱扫描、高碘酸氧化、斯密斯降解和甲基化实验结果推断出灰树花多糖的构成单体的构型和比例。

3、利用RAW264.7细胞考察了GFP-A对于细胞免疫活性的影响及其作用机理。中性红和MTT实验结果证实,在一定浓度范围内GFP-A对巨噬细胞的吞噬能力和增殖活性具有显著促进作用。扫描电镜观察结果表明,GFP-A作用后的巨噬细胞形态呈现明显活化状态。AO和PAS染色结果显示GFP-A能提高巨噬细胞核酸代谢和糖原分泌能力,提高巨噬细胞酸性磷酸酶、溶菌酶和超氧化物歧化酶活性。

4、通过免疫低下小鼠模型进行GFP-A灌胃处理,研究了其对免疫器官指数、脾脏淋巴细胞增殖、巨噬细胞吞噬作用、NK细胞活性,血清和肝脏中相关酶的含量表达的影响,结果表明GFP-A能够显著提高机体的免疫活性

5、利用Western-blot探讨了GFP对Raw264.7细胞的MAPK、TAK和表面受体TLR4的影响,阐明其免疫调节途径。