本发明属于生物工程技术领域，涉及工业微生物的育种，尤其是构建一种高产丁酸乙酯酿酒酵母菌株的方法及其应用。

通过在出发菌株中过表达乙酰辅酶A酰基转移酶基因Erg10、3‑羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因Hbd、3‑羟基丁酰辅酶A脱水酶基因Crt、反式‑2‑烯酰辅酶A还原酶基因Ter、以及醇酰基转移酶基因AAT，以获得一株具有产丁酸乙酯能力的酵母菌株EST，与出发菌不产丁酸乙酯相比，其丁酸乙酯产量达到了77.33±3.79mg/L。

在对Ter基因和AAT基因进行二拷贝表达后获得菌株EDST，丁酸乙酯的产量达到了99.65±7.32mg/L，与EST菌株相比产量提高了28.9％，同时还产生了40.93±3.18mg/L的巴豆酸乙酯，取得了预料不到的技术效果，为酿造出风味优良且更有利于健康的白酒奠定了理论基础，具有广阔的市场前景。